XXV Jornadas Científicas de la Sociedad de Biología de Córdoba.
XXV Jornadas Científicas de la Sociedad de Biología de Córdoba.
18 al 19 de agosto de 2022
Río Cuarto, Córdoba, Argentina
Simposio II: Biotecnología
ROL DE LA INCORPORACIÓN DE ESTEROLES EN LA CRIOPRESERVACIÓN DE GAMETAS DE ESPECIES DE INTERÉS PECUARIO
Buschiazzo Jorgelina
Laboratorio Biotecnología de la Reproducción, Departamento de Producción Animal, Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible (IPADS Balcarce, CONICET-INTA), Balcarce, Buenos Aires
E-mail: buschiazzo.jorgelina@inta.gob.ar
Resumen: Teniendo en cuenta que la criopreservación provoca alteraciones en la membrana celular, hemos estudiado cómo ciertas modificaciones lipídicas pueden aumentar la sobrevida post-criopreservación de gametas sensibles a estos procedimientos como el ovocito bovino y el espermatozoide ovino. Utilizamos la droga metil-β-ciclodextrina (MβCD) que puede actuar como aceptora o dadora de esteroles. La MβCD se usó no sólo para agregar colesterol a la membrana de los ovocitos antes de la vitrificación sino también para remover, luego del calentamiento, el colesterol previamente agregado. La modulación del colesterol de membrana no afectó el estado apoptótico de los ovocitos y mejoró la viabilidad después de la vitrificación según la evaluación de la activación de caspasas in situ. Mediciones fluorimétricas basadas en una reacción enzimática que detecta tanto el colesterol libre como los ésteres de colesterol, revelaron que los ovocitos y las células del cumulus presentan diferentes niveles de colesterol dependiendo del período estacional. Los ovocitos y las células del cumulus recuperaron su nivel de colesterol original luego de su remoción, independientemente de la estación. La vitrificación afectó la distribución de un marcador putativo de rafts de membrana (GM1), mientras que la modulación del colesterol preservó la organización de la membrana plasmática al mantener el nivel del gangliósido en la membrana. En cuanto a los espermatozoides ovinos, estos son particularmente sensibles a la criopreservación debido a su bajo nivel de colesterol en la membrana. Además de aumentar el contenido de colesterol en la membrana espermática, evaluamos la incorporación de desmosterol como un intermediario clave en la biosíntesis del colesterol. Estudios con un colesterol fluorescente revelaron la presencia de sub-poblaciones de espermatozoides de carnero compatibles con diferentes contenidos de esteroles, y una alta concentración de rafts principalmente en la región del acrosoma. La incorporación efectiva de ambos esteroles previo a la congelación en un diluyente libre de esteroles aumentó el orden lipídico de la membrana y mejoró los parámetros funcionales del semen después de la refrigeración y la congelación-descongelación. Ensayos de fecundación in vitro e in vivo mostraron que los
espermatozoides congelados que previamente incorporaron desmosterol tienen una mayor capacidad para desencadenar la activación metabólica de los ovocitos en ensayos de fecundación heteróloga in vitro. Más aun, la inseminación artificial via cervical con espermatozoides congelados que incorporaron desmosterol aumentó marcadamente la preñez a término de las ovejas. La incorporación controlada de esteroles es una estrategia que mejora la sobrevida funcional de gametas sensibles a la criopreservación con implicancias en la organización e integridad de la membrana celular.
